Molekularer Aufbau der glomerulären Schlitzmembran

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Der glomeruläre Filter ist ein komplexes Gebilde mit einer vielschichtigen, dreidimensionalen Struktur. Die glomeruläre Schlitzmembran spielt eine Schlüsselrolle im Nierenfilter und ist von enormer Bedeutung für die Forschung. Wichtige Bestandteile der Schlitzmembran sind das intrazellulär verankerte Protein Podocin sowie die Transmembranproteine Nephrin und Neph1, während weitere, teils unbekannte Proteine ebenfalls bedeutende Funktionen ausüben. Diese Arbeit versucht erstmals eine Quantifizierung der drei Hauptbestandteile der Schlitzmembran. Zunächst wurde die qualitative, elektronenmikroskopische Darstellung von Nephrin getestet. Anschließend erfolgte eine quantitative Analyse von Podocin, Nephrin und Neph1 mittels der SDS-Freeze Fracture Replika-Technik. Die Ergebnisse zeigten für Podocin 84,94 Goldmarkierungen pro µm², für Nephrin 5,82 pro Schlitz und für Neph1 3,04 pro Schlitz. Eine Doppelfärbung von Nephrin und Neph1 ergab kein geordnetes Muster. Die Analyse von Knockout-Mäusen zeigte eine circa 80%ige Reduktion der Gold-Markierungen für Podocin, während Nephrin und Neph1 nahezu keine Markierungen aufwiesen. Immunfluoreszenz-Färbungen und Western Blots wurden durchgeführt, um neue Kandidaten für den Schlitzmembranproteinkomplex darzustellen. Ein Antikörper gegen die Tyrosinkinase MerTK zeigte eine klare Bande im Western Blot und wurde für die SDS-FRL verwendet, wodurch dieses Protein erstmals mit einem Mittelwert von 3